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血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案

更新時(shí)間:2024-07-24       點(diǎn)擊次數(shù):160

簡(jiǎn)介

本方法使用創(chuàng)新型分體式HMR凈化管/96孔板結(jié)合96正壓固相萃取裝置一步式凈化血清樣品,再通過(guò)LC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè),回收率達(dá)90%左右。樣品處理過(guò)程簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確。

 

方法優(yōu)勢(shì)

Ø                      蛋白沉淀和磷脂去除一步完成,可有效去除血清中蛋白、磷脂類化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

Ø                      通過(guò)式凈化,極大簡(jiǎn)化前處理步驟,約1h即可完成前處理操作

Ø                      上樣量僅需50μL,大大節(jié)省了寶貴的樣品

Ø                      試劑耗材使用量更少,更加環(huán)保節(jié)約

Ø                      柱效遠(yuǎn)超直通式SPE,回收率穩(wěn)定,可達(dá)90%左右

 

配套設(shè)備及耗材

序號(hào)

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品描述

1

96孔正壓固相萃取裝置

EZ PRE-96正壓固相萃取裝置

2

96孔氮吹儀

EZ VAP-96氮吹儀

3

雙位96孔氮吹儀

EZ VAP-192雙位96孔氮吹儀

4

MixMate® 混勻小精靈

MixMate®主機(jī),不含樣品管管架,230 V/50-60 HzCN

5

8道移液器

8-通道,10-100µL, 可調(diào)量程

6

超效分體96孔集成板HMR

HMR S-micro BIO 96 Well, 15mg, 1 mL, 1/PK

7

超效分體96SPEHMR

HMR S-micro BIO SPE, 15mg, 1 mL, 100/PK

8

超效96孔板微徑小柱適配器

Micro columnadapter rackSUS,1/PK

9

20全氟混標(biāo)(包含方法中15種全氟)

PFAS Mixture with 20 analytes, 5 µg/mL in Methanol/Water,1mL

10

11--3-氧雜全氟十一烷磺酸鉀

50 µg/mL1mL,甲醇/水,CAS83329-89-9

11

13種全氟內(nèi)標(biāo)

Mass-Labelled PFC Extraction Standards Solution 2.0μg/mL 1.2mL

12

血清中全氟質(zhì)控品Y2403

INSPQ PFC Reference Material Y2403,1/kit

13

血清中全氟質(zhì)控品Y2301

INSPQ PFC Reference Material Y2301,1/kit

14

血清中全氟質(zhì)控品Y2304

INSPQ PFC Reference Material Y23041/kit

15

Leosil C18/PFP核殼柱(GB23200.121方法專用)

Leosil Shell C18/PFP, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/PK

16

96孔收集板

Collection Plate, 1 mL/Round/U-Shaped, 96 Well, 10/PK

17

封板膜

660 Tape Sealing Pad for 96 Well Plate,25 Sheets/Pad10Pad/pk

 

樣品前處理

血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案 

 

儀器條件

1)色譜條件

色譜柱:Leosil C18/PFP核殼柱 (2.7µm, 100* 2.1mm

流動(dòng)相:5mmol/L乙酸甲醇(A),5mmol/L乙酸水溶液(B

流速:0.4mL/min

柱溫:50℃

進(jìn)樣量:2μL

 

流動(dòng)相梯度表

血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案 

 

2)質(zhì)譜條件

AB 6500+質(zhì)譜檢測(cè)器采用多反應(yīng)檢測(cè)模式(Multiple

Reaction MonitoringMRM),ESI負(fù)離子模式。

離子源:電噴霧離子源;

掃描方式:負(fù)離子掃描;

檢測(cè)方式:多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)(MRM);

電噴霧電壓:-4500V

離子源溫度:400℃;

輔助氣160psi

輔助氣260psi;

氣簾氣:30psi;

碰撞氣體:Medium

 

目標(biāo)PFASs的離子對(duì)、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見(jiàn)下表

血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案 

血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案 

 

方法定量限

在以下兩種方法中取最大值作為本項(xiàng)目的方法定量限(Limit of quantification,LOQ):(1)在實(shí)際血清基質(zhì)中滿足信噪比大于10的最低濃度,信噪比采用RMSRoot Mean Square,RMS)方法;(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍內(nèi)滿足實(shí)測(cè)濃度在理論值偏差±20%之內(nèi)的最低濃度。由于本研究中樣品未經(jīng)濃縮和稀釋,無(wú)稀釋倍數(shù),因此方法定量限即為LOQ,如下表。

 

16PFASs的定量限

血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案 

 

回收率和精密度

血清中16種全氟化合物不同水平加標(biāo)回收率和精密度(n=6

血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案 

血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測(cè)定-超高效方案 

 

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、內(nèi)標(biāo)體積太小(50、20微升),稍微有損失,就會(huì)影響定量,所以建議先加樣品、再加內(nèi)標(biāo),最后加乙腈;

2、加液體過(guò)程中,一定注意盡量讓移液槍的槍頭接近凈化管中最上層篩板加液。需要正確使用移液槍,特別是小體積加樣時(shí);

3、建議分兩次加入乙腈。如果只加一次乙腈,可能洗脫不完全,凈化管里有殘留。壓完一次,加入乙腈,再正壓;

4、乙腈:血清的比例從31開(kāi)始優(yōu)化;

5、其他項(xiàng)目根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇甲醇或乙腈作為提取溶劑。

 

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